今天阿莫来给大家分享一些关于dna粗提取dna粗提取步骤顺序方面的知识吧,希望大家会喜欢哦
1、将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为95%的冷酒精溶液中,并用玻璃棒缓缓地轻轻搅拌溶液(玻璃棒不要直插烧杯底部)。沉淀35min后,可见白色的DNA絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转,絮状物会缠在玻璃棒上。
2、DNA提取(粗提取)酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb甲酰胺解聚法:破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得DNA可得DNA200kb左右。
3、DNA提取实验的基本原理是在破碎细胞壁的条件下,使用化学方法和物理方法将DNA从其他细胞组分中分离出来。DNA鉴定流程包括以下步骤:细胞破碎:通过机械破碎、超声波处理或细胞裂解液等方法,将细胞破碎,并释放其中的DNA。
1、配制染色剂。用蒸馏水配制万分之五的溴化乙锭(EB)溶液。将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上,再滴1滴EB溶液染色。将蜡纸放在紫外灯(260nm)下照射(暗室中),可见橙红色的萤光(DNA的紫外吸收高峰在280nm处)。
2、其它试剂:液氮、异丙醇、te缓冲液,无水乙醇、70%乙醇、3mol/lnaac。操作步骤:在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液ⅰ,60℃水浴预热。
3、鉴定dna的试剂是二苯胺,原理是当NaCl的物质的量浓度为0.14mol/L时,DNA的溶解度*。利用这一原理,可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。
4、通常,氯仿与异戊基发酵的比例为24:1。苯酚,氯仿和异戊醇的比例也可以按25:24:1的比例使用。提取DNA时,为了均匀混合,必须将容器摇动几次,并且在混合溶液中容易产生气泡,并且气泡会阻止相互作用。
★制取方法:①制备鸡血细胞→取刚杀过的鸡血(要干净,不能有杂质)50毫升左右,加入柠檬酸钠防止凝血;除去上面的清液,因为DNA主要存在于细胞核中。
DNA的粗提取①准备材料将新鲜菜花和体积分数为95%的酒精溶液放入冰箱冷冻室,至少24h。②取材称取30g菜花,去梗取花,切碎。③研磨将碎菜花放入研钵中,倒入10mL研磨液,充分研磨10min。
植物组织提取基因组DNA材料幼嫩叶子。设备移液器,冷冻高速离心机,台式高速离心机,水浴锅,陶瓷研钵,50ml离心管(有盖)及5ml和5ml离心管,弯成钩状的小玻棒。
植物总DNA提取的必备的设备有:研钵、液氮罐、电热恒温水浴锅、小容量离心机、大容量离心机、冰箱、紫外分光光度计等。
一般来说,需要一台高通量的基因分析仪,两台PCR扩增仪,一台纯水仪、一台DNA纯化仪,以及离心机、保温仪、振荡器、生物安全柜、移液器、冰箱等若干,您也可以根据实验室的大小和自己的需求增加别的仪器。
在DNA的粗提纯过程中,高盐浓度有利于DNA的溶解和纯化,但是盐浓度过高也会影响纯化效果。通常在DNA粗提纯中使用NaCl浓度为0.15M的TE缓冲液,可有效维持DNA的稳定性。
(1)粗提取原理:在NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时,DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而降低;在0.14mol/L时,DNA的溶解度最小;当NaCl溶液浓度继续增加时,DNA溶解度又增大。
高一生物DNA的粗提取与鉴定知识点该知识点主要包括提取DNA的方法、实验设计及操作提示等要点。提取DNA的方法:首先要掌握提取生物大分子的基本思路,其次是要掌握DNA提取与鉴定的具体方法。
本文到这结束,希望上面文章对大家有所帮助
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